羊布氏桿菌病是羊的一種慢性傳染病。主要侵害生殖系統(tǒng)。羊感染后,以母羊發(fā)生流產(chǎn)和公羊發(fā)生睪丸炎為特征。布氏桿菌病也是一種人畜共患的慢性傳染病。其特點也是生殖器官和胎盤發(fā)炎,引起流產(chǎn)、不育和各種組織的局部病癥。
布病病原,病原為布氏扦菌。它存在于病畜的生殖器官、內(nèi)臟和血液。該菌對外界的抵抗力很強,在干燥的土壤中可存活37天,在冷暗處和胎兒體內(nèi)可存活6個月。1%來蘇爾,2%的福爾馬林,5%的生石灰水15分鐘可殺死病菌。
布氏桿菌病的檢測方法有:試紙卡檢測、虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗(萊特試驗)、半胱氨基酸試管凝集試驗、抗人球蛋白試驗,生產(chǎn)中常用的方法為試紙卡檢測、虎紅平板凝集試驗,詳細介紹如下:
一、布病試紙檢測
1、原理
布氏桿菌抗體快速檢測試紙基于膠體金免疫層析技術(shù)。檢測時,樣品中的布氏桿菌抗體與膠體金包被的抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物,并沿著試紙流向NC膜的另一端。當該復(fù)合物流到膜上的T區(qū)時,固定在膜上的特異性抗原捕獲該復(fù)合物并逐漸凝集成一條可見的T線。C線出現(xiàn)則表明免疫層析發(fā)生,即試紙有效;T線出現(xiàn)則表明樣品中含有布氏桿菌抗體。
2、保存和穩(wěn)定性
試紙卡于室溫(<30℃)陰涼干燥處保存,不可冷凍,避免陽光直曬,自生產(chǎn)日期起18個月內(nèi)有效。
3、測試步驟
1.采血1 ml,1500轉(zhuǎn)/分鐘,離心。(樣品若不能立即測試,應(yīng)冷藏保存,超過24小時,應(yīng)冷凍保存。)
2. 將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復(fù)至室溫。
3.用吸管吸取血清,向平坦放置的試紙卡加樣孔中緩慢滴入1滴。
4.取出試紙卡包裝中的稀釋液,用吸管吸取,向試紙卡的加樣孔緩慢滴入2滴。
5.10分鐘判斷結(jié)果,15分鐘后的結(jié)果無效。
4、結(jié)果判斷
陽性:C線顯示紅色色帶,T線也顯示紅色色帶,無論顏色深淺均判為陽性。
陰性:C線顯示紅色色帶,T線不顯示紅色色帶,判為陰性。
無效:C線不顯示紅色色帶,無論T線是否顯示紅色色帶,該試紙均判為無效。
1.如果購買時發(fā)現(xiàn)過期,破損,污染的產(chǎn)品,請在購買處進行更換。
2.所有試紙啟封后1小時內(nèi)使用。
3.本品為一次性產(chǎn)品,請勿重復(fù)使用。
4.請勿使用非本品隨附的稀釋液。
5.請勿使用自來水、純化水及蒸餾水作為陰性對照。
6.如滴加檢測液后30秒內(nèi),在測試窗口無液體移行,則再補加1滴檢測液。
7.檢測樣品可能具有潛在感染性,樣品和使用過的試劑應(yīng)作為微生物危險品處理。
8.試紙為獸醫(yī)體外快速診斷工具,僅提供定性檢測結(jié)果,應(yīng)綜合臨床癥狀或其它常規(guī)檢測方法進行確診。
二、虎紅平板凝集實驗
如果牲畜感染布病,機體自身的免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生抗體,我們通過采集已感染動物的血清制作成的抗原,和等量的待檢動物血清相混合,如果待檢動物血清中含有抗體,那么就會和抗原相結(jié)合形成沉淀物,我們稱為陽性,如果沒有沉淀出現(xiàn),我們稱為陰性。陽性說明被檢測動物感染布病,陰性說明沒有感染。
2、實驗設(shè)備
1、離心機
2、微量移液器,黃色吸頭
3、抗原。哈藥等生產(chǎn),有些地方畜牧局可以提供。
4、5ml離心管,5ml采血注射器,需貼標簽,標簽跟羊的耳標一致。
5、玻璃板畫格或?qū)I(yè)滴定板。玻璃板畫格標簽、離心管標簽、羊耳標三者一致。
6、牙簽,醫(yī)用手套,記錄本,標記筆。
3、操作步驟
1、采血,靜脈采血3ml。緩慢注入離心管。做好標記,血清號和羊號一致。
2、離心。4000R|min 離心7分鐘。
3、用微量移液器取0.03ml待檢血清放置于滴定板或玻璃板上
4、取0.03ml抗原和血清相混合。
每只羊單獨一個吸頭,用牙簽攪拌均勻,等待4分鐘左右看結(jié)果。
1、若無凝集為陰性,記為“—”。
2、如果出現(xiàn)少量凝集反應(yīng)為陽性,
一般再去采血復(fù)檢。記為“+”。
3、如果出現(xiàn)50%凝集,記為“++”。
4、如果大部分凝集,記為“+++”。
5、如果全部凝集。記為“++++”。
本實驗檢測結(jié)果不是百分之百準確,進一步確診需要*學(xué)和生化實驗。
結(jié)果對比
目前,本病尚無*的藥物治療,只有加強預(yù)防檢疫。
1、 定期檢疫。羔羊每年斷乳后進行一次布氏桿菌病檢疫。成羊兩年檢疫一次或每年預(yù)防接種而不檢疫。對檢出的陽性羊要捕殺處理,不能留養(yǎng)或給予治療。
2、免疫接種。當年新生羔羊通過檢疫呈陰性的,用“豬2號弱毒活菌苗”飲服或注射。羊不分大小每只飲服500億活菌。疫苗注射,每只羊25億菌,肌肉注射。
3、羊群受感染后無治療價值,發(fā)病后羊群防治措施是用試管凝集反應(yīng)或平板凝集反應(yīng)進行羊群檢疫。
發(fā)現(xiàn)呈陽性和可疑反應(yīng)的羊均應(yīng)及時隔離,以淘汰屠宰為宜,嚴禁與假定健康羊接觸。必須對污染的用具和場所進行徹底消毒;流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水和產(chǎn)道分泌物應(yīng)深埋。