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布病檢測卡膠體金檢測原理和技術(shù)分類介紹!

發(fā)表時間:2023-02-17

膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù),是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù),有其獨特的優(yōu)點。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標(biāo)記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能利用到。


1971年Faulk 和Taytor將膠體金引入免疫化學(xué),此后免疫膠體金技術(shù)作為一種新的免疫學(xué)方法,在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用主要是免疫層析法(immunochromatogra-phy)和快速免疫金滲濾法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA),用于檢測 HBsAg、HCG 和抗雙鏈DNA抗體等,具有簡單、快速、準(zhǔn)確和無污染等優(yōu)點。


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膠體金檢測原理


膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負(fù)電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷,可與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團形成牢固的結(jié)合,由于這種結(jié)合是靜電結(jié)合,所以不影響蛋白質(zhì)的生物特性。


膠體金除了與蛋白質(zhì)結(jié)合以外,還可以與許多其它生物大分子結(jié)合,如SPA、PHA、ConA等。根據(jù)膠體金的一些物理性狀,如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應(yīng),加上結(jié)合物的免疫和生物學(xué)特性,因而使膠體金廣泛地應(yīng)用于免疫學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)和細胞生物學(xué)等領(lǐng)域。


膠體金標(biāo)記,實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負(fù)電荷,與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質(zhì)有很強的吸附功能,可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、*、*、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結(jié)合,因而在基礎(chǔ)研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。


免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中,這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。


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膠體金檢測常用檢測技術(shù)


免疫膠體金光鏡染色法:細胞懸液涂片或組織切片,可用膠體金標(biāo)記的抗體進行染色,也可在膠體金標(biāo)記的基礎(chǔ)上,以銀顯影液增強標(biāo)記,使被還原的銀原子沉積于已標(biāo)記的金顆粒表面,可明顯增強膠體金標(biāo)記的敏感性。


免疫膠體金電鏡染色法:可用膠體金標(biāo)記的抗體或抗抗體與負(fù)染病毒樣本或組織超薄切片結(jié)合,然后進行負(fù)染??捎糜诓《拘螒B(tài)的觀察和病毒檢測。


斑點免疫金滲濾法:應(yīng)用微孔濾膜(如膜)作載體,先將抗原或抗體點于膜上,封閉后加待檢樣本,洗滌后用膠體金標(biāo)記的抗體檢測相應(yīng)的抗原或抗體。


膠體金免疫層析法:將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標(biāo)記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結(jié)合墊上,當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后,通過毛細作用向前移動,溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng),再移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時,待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條,使用十分方便。


快速金標(biāo)試劑技術(shù):是將特異的抗體先固定于酸類纖維素膜的某一區(qū)帶,當(dāng)該干燥的酸類纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)后,由于毛細管作用,樣品將沿著該膜向前移動,當(dāng)移動至固定有抗體的區(qū)域時,樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合。同時利用金粒具有高電子密度的特性,在金標(biāo)蛋白結(jié)合處。當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色的斑點。既為快速的金標(biāo)檢測方法原理。生產(chǎn)快速而精確試劑,要點在于所采用的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的靈敏性及特異性等是否能達到*的標(biāo)準(zhǔn),此為金標(biāo)試劑的質(zhì)量之最重要的標(biāo)準(zhǔn)。


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