虎紅平板凝集試驗(RBT,Rose Bengal Test)是國際貿(mào)易中牛、羊、豬布魯氏菌病檢測的指定試驗,在我國也用于人布魯氏菌病監(jiān)測的初篩??乖墙?jīng)培養(yǎng)滅活后,離心收集菌體用虎紅染料染色后懸浮于乳酸緩沖液中制成。由于所用的抗原是酸性( PH3.6-3.9 )帶色的抗原,該抗原與被檢血清作用時能抑制血清中的IgM類抗體的凝集活性、檢查的抗體是IgG類,因此提高了反應(yīng)的特異性。該方法靈敏度高,操作方便,檢測快速且價格便宜,適于動物群體布魯氏菌病的普查。
布魯氏菌虎紅平板凝集試驗具體操作方法如下:
一、材料準備
1、布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原、布魯氏菌標準陽性血清、布魯氏菌陰性血清。
2、受檢血清應(yīng)新鮮,無明顯蛋白凝塊,無溶血和腐敗。
3、潔凈的玻片或玻璃板。在其上劃分成4cm2的方格。
4、微量移液器及無菌吸頭。
5、干凈牙簽或火柴桿。
二、操作方法
1、在玻璃板各方格標記受檢血清編號,然后加入相應(yīng)的血清25μL(動物布魯氏菌病診斷技術(shù)GB/ 18646-2018)。
2、在各待檢血清旁滴加虎紅抗原25μL。
3、用滅菌牙簽類小棒快速混勻血清和抗原,涂成2cm直徑的圓形,于4分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
三、結(jié)果判定
在標準陰性血清不出現(xiàn)凝集、標準陽性血清出現(xiàn)凝集時,試驗成立,方可對受檢血清進行判定。凡出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者(“+”以上反應(yīng))判為陽性。
虎紅平板凝集試驗判定標準:
“—”無凝集,呈均勻粉紅色
“+”稍能查到凝集,稍有卷邊形成,凝集物間液體呈紅色。
“++”形成較明顯卷邊,凝集塊間液體稍清亮。
“+++”凝集反應(yīng)較強,液體較清亮。
“++++”凝集塊呈菌叢狀,凝塊間液體明顯清亮。
四、注意事項
布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原儲藏溫度:2-8℃,使用前需充分搖勻,務(wù)必恢復(fù)至室溫或18度以上后再檢測。
試驗應(yīng)設(shè)標準陰、陽性血清對照。