豬O型口蹄疫（FMD）是由O型口蹄疫病毒（FMDV）引起的豬的一種急性、熱性、高度觸摸性流行癥。除感染豬外，還可感染牛、羊等偶蹄動物。該病傳播敏捷，發(fā)病率高，是國際動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)

定有必要陳述的流行癥之一，中國政府規(guī)定為一類動物疫病。該病不光引起幼畜死亡，生產(chǎn)功能下降，并且嚴重影響牲畜及畜產(chǎn)品流轉(zhuǎn)和交易活動。

口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV抗體檢O型口蹄疫病毒抗體，用于評估口蹄疫苗免疫狀況。

ELISA法，在酶標板條微孔上預包被口蹄疫病毒抗原。在試驗中，加入稀釋后的待檢血清VP1單抗，樣本中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合；經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物；在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。

組份

自備的設備及試劑

微量移液器：μμμμ2. 一次性移液器吸頭。

量筒：4. 96孔板酶標儀。

6. 洗瓶或洗板機。

樣品制備

洗滌液的準備

10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項

，應將試劑盒各組份放置室溫至少。

3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。

5. 檢測板拆封后應(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃6. 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。

8. 抗原包被板為一次性用品，不得重復使用；

操作步驟

每次試驗均設置陽性對照2. 將樣品稀釋液按/孔加入到微孔反應板內(nèi)，之后將待檢樣品血清按/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；

蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置4. 250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復4-6次，*在干凈吸水紙上拍干。

每孔加酶結(jié)合物1. 4-6次, 方法同4。切記*在干凈吸水紙上拍干。

每孔加顯色液μ3. 50μl，使反應終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

作參比波長）讀取吸光度試驗：

(N)OD值>0.5，同時陽性對照(P)阻斷率>50%；

PI (阻斷率)=  1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）

牛、羊樣本

PI≤45%則判斷為陰性。

PI(阻斷率)>35%則判斷為陽性；

貯存方法 2 - 8oC下貯存。

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